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Espécies dos gêneros Alteromonas, Flavobacterium, Micrococcus, Staphylococcus e Pseudomonas, conhecidas como lipolíticas, possuem a capacidade de hidrolisar triglicerídeos devido à produção de lipases extracelulares.
Os estágios de análise podem ser geralmente listados da seguinte forma:
• Inocular uma placa de ágar VBB pré-seca espalhando 1 mL da amostra no ágar.
• Colocar invertido placas a 5°C para Pseudomonas lipolíticas. por até 7 dias e para bactérias lipolíticas mesófilas a 30°C por até 3 dias. É preenchido com solução de sulfato de cobre (0,1%) e deixado por 15 minutos.
• O reagente é derramado das placas e as placas são suavemente lavadas em água corrente por 1 minuto para remover o excesso de sulfato de cobre.
• Onde ocorre a lipólise, uma área de cor verde azulada deve se formar ao redor das colônias devido à formação de sais de cobre insolúveis de ácidos graxos. Isto representa ácidos graxos livres resultantes da lipólise da gordura.
• O número obtido pela contagem de colônias é multiplicado pela taxa de diluição e dividido pela quantidade de inoculação para calcular o número de bactérias lipolíticas.
A determinação de bactérias lipolíticas pode ser realizada em vários produtos lácteos, como manteiga e creme.